酵母双杂交xgal培养基中加入aba为什么酵母双杂交aba浓度-传统节日网

Clontech酵母双杂系统中引入了一个AbA抗性报告基因，和X-α-Gal共用同一个Gal4启动子。虽然营养缺陷型筛选压力很高，但是直接在四缺培养基上长得会很不好甚至直接不长。于是就引入了二缺上先用AbA筛一轮，并用X-α-Gal显色辅助判断，再转移到四缺培养基上，避免筛选不到的问题。

　离心技术：

　　是分离纯化蛋白质、酶、核酸（DNA、RNA）、细胞的最常用方法之一。

　　电泳（electrophoresis）：带电粒子在电场中向着与其所带电荷相反方向电极移动的现象。

　　可用于分离不同分子量的生物大分子。

　　1.蛋白质的电泳：

　　用途：蛋白质的定量。

　　2.核酸的电泳：

　　用途：用于核酸的分离、鉴定、纯化、回收。

　　比如：我只需要长度300bp左右的分子。那么，电泳后，在切胶过程中，只切300bp处的分子即可。

　　蛋白质研究相关的技术：

　　1. 含量测定：

　　2. 结构的测定：

　　（1）一级结构的测定：搞清楚蛋白质肽链的氨基酸排列顺序。

　　方法：Edman降解法、质谱法（MS, 将蛋白水解，多肽链分成小段。检测肽段）

　　（2）空间结构测定：蛋白空间结构分析比一级结构分析复杂得多。

　　方法：X射线衍射晶体分析法、核磁共振法等。

　　3. 功能的测定：

　　（1）酵母双杂交（YTH）：

　　假设：欲检测蛋白X与蛋白Y是否相互作用。

　　检测方法：

　　将蛋白X与报告基因转录因子的BD融合；

　　将蛋白Y与AD融合；

　　确认蛋白X与蛋白Y形成的复合体能否激活报告基因的表达。如果能激活报告基因的表达，说明：X与Y形成了复合体，则BD和AD靠近，激活了下游报告基因的表达；反之，报告基因不表达。

　　原理：

　　真核生物的转录因子（尤其是酵母转录因子GAL4），包括两个彼此分离、但功能必需的结构域：一个是与DNA结合的结构域-BD；一个是转录激活域-AD。BD识别转录因子效应基因的上游序列并与之结合；AD通过与转录复合体的其他成分作用，启动下游的基因转录。

　　即使BD与AD分开，但如果在空间上较为接近时也能激活转录。——利用转录因子的BD、AD这一特性，通过检测转录因子是否启动了其效应基因的表达，可研究蛋白质X与Y是否相互作用。

　　（2）蛋白质芯片技术：一种高通量、微型化、自动化的蛋白质分析技术。一次试验中可同时检测几百甚至几千种目标蛋白或多肽。

　　（3）免疫印迹技术 Western blotting：利用抗原抗体特异反应的原理。

　　用途：检测样品中特定蛋白质是否存在以及半定量分析、研究蛋白质间的相互作用。

因为转进去的两个质粒上具有合成两种氨基酸的基因，所以在两缺板子上能生长。如果两个蛋白能互作，报告基因被激活，所以能在三缺或四缺板子上生长，如果不能互作，就不生长。

酵母双杂是验证蛋白与蛋白之间的互作，酵母单杂是验证蛋白与DNA之间的互作。

酵母单杂交技术是在酵母双杂交基础上发展而来的一种研究核酸-蛋白相互作用的工具，被广泛用于研究真核细胞内基因的表达调控，如鉴别DNA结合位点发现潜在的结合蛋白基因、分析DNA结合结构域信息等。

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